植物磷酸果糖激酶（PFK）ELISA試劑盒的使用方法如下：
試劑盒組成：該試劑盒包括微孔酶標板、標準品、樣本稀釋液、檢測抗體-HRP、洗滌緩沖液、底物A、底物B、終止液、封板膜、說明書和自封袋。
樣品處理： 樣本采集后應盡早提取，避免疊氮鈉（NaN3）的存在，因為NaN3會抑制HRP活性。 植物樣本需離心取上清，保存時分裝并凍存于-20℃，避免反復凍融。
實驗步驟： 準備試劑：將20×洗滌緩沖液按1:20稀釋為工作液。
操作步驟： 將室溫平衡后的鋁箔袋中的酶標板取出，設置標準品孔和樣本孔。 向標準品孔和樣本孔中分別加入標準品和樣本各50μL，空白孔不加任何試劑。 加入HRP標記的檢測抗體100μL，用封板膜封住反應孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60分鐘。 棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液（350μL），靜置1分鐘，甩去洗滌液，重復洗板5次。 每孔加入底物A和B各50μL，避光孵育15分鐘。 每孔加入終止液50μL，15分鐘內，在450nm波長下測定各孔的OD值。
結果計算： 繪制標準曲線：以標準品濃度為橫坐標，OD值為縱坐標，計算出直線回歸方程。將樣本的OD值代入方程，計算出樣本中植物磷酸果糖激酶的濃度。
注意事項： 實驗過程中需嚴格按照說明書操作，試劑盒僅限于科學研究使用，不得用于臨床診斷。 操作時需避免交叉污染，不同試劑需分別使用不同的移液器和槍頭。 樣本和試劑的保存條件需嚴格按照說明書要求，避免反復凍融和光照影響。 通過以上步驟，可以準確測定植物樣本中磷酸果糖激酶的濃度。
|
400-788-2680
