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生化生理檢測 - 過氧化物酶(POD)代測檢測服務

過氧化物酶(POD)代測檢測服務

過氧化物酶(POD)代測檢測服務

    測定意義

    過氧化物酶是植物體內(nèi)重要的呼吸酶類,其活性高低與酚類物質(zhì)代謝、物抗性密切相關。通過實驗掌握提取POD和測定其活性的方法及其原理。過氧化物酶催化H202氧化酚類,生成醌類化合物,此化合物進一步縮合或與其他分子縮合,產(chǎn)生顏色較深的產(chǎn)物。本實驗以愈創(chuàng)木酚為底物,過氧化物酶催化H202將愈創(chuàng)木酚氧化生成茶褐色產(chǎn)物,此產(chǎn)物在470nm波長處有最大吸收峰,故可通過測定470nm波長下的吸光度變化得知過氧化物酶的活性。

    操作方法

    1.酶液制備

    稱取植物材料1g,加入20mmol/LKH2PO4溶液5m1,于研缽中研磨成勻漿,在33000r/min下離心10min,上清液轉入25m1容量瓶中,殘渣再用5mlKH2PO4溶液提取一次,合并兩次上清液,定容,混勻,貯于冷涼處備用。

    2.比色測定

    取光徑1cm比色杯2只,于1只中加入已混勻的反應混合液3m1,KH2PO4溶液1ml,作為參比液;另一只中加入反應混合液3ml,酶液1m1(如酶活性過高可稀釋之),立即記時并置于分光光度計中。在470nm下測定光密度,每隔1min讀數(shù)一次,連續(xù)測30min,每次測定前重新用對照校準。若氣溫較低,應適當提高室溫,以37℃為最適宜。

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