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細菌脂多糖(LPS)elisa檢測試劑盒
細菌脂多糖(LPS)elisa檢測試劑盒
品牌:原鑫生物
貨號: YX-121619B
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細菌脂多糖(LPS)elisa檢測試劑盒

細菌脂多糖(LPS)elisa檢測試劑盒圖1

酶聯(lián)免疫吸附劑測定(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)是酶免疫測定技術(shù)中應(yīng)用最廣的技術(shù)。1971年瑞典學(xué)者Engvail和Perlmann,荷蘭學(xué)者Van Weerman和Schuurs分別報道將免疫技術(shù)發(fā)展為檢測體液中微量物質(zhì)的固相免疫測定方法,即酶聯(lián)免疫吸附測定法 (enzyme-linked immunosorbent assay , ELISA) 。ELISA已成為分析化學(xué)領(lǐng)域中的前沿課題 ,它是一種特殊的試劑分析方法,是在免疫酶技術(shù)( immunoenzymatic techniques ) 的基礎(chǔ)上發(fā)展起來的一種新型的免疫測定技術(shù)。


ELISA 的基礎(chǔ)是抗原或抗體的固相化及抗原或抗體的酶標記。結(jié)合在固相載體表面的抗原或抗體仍保持其免疫學(xué)活性,酶標記的抗原或抗體既保留其免疫學(xué)活性,又保留酶的活性。在測定時,受檢標本(測定其中的抗體或抗原)與固相載體表面的抗原或抗體起反應(yīng)。用洗滌的方法使固相載體上形成的抗原抗體復(fù)合物與液體中的其他物質(zhì)分開。

再加入酶標記的抗原或抗體,也通過反應(yīng)而結(jié)合在固相載體上。此時固相上的酶量與標本中受檢物質(zhì)的量呈一定的比例。加入酶反應(yīng)的底物后,底物被酶催化水解或氧化還原反應(yīng)而成為有色產(chǎn)物,產(chǎn)物的量與標本中受檢物質(zhì)的量直接相關(guān),故可根據(jù)呈色的深淺進行定性或定量分析。由于酶的催化效率很高,間接地放大了免疫反應(yīng)的結(jié)果,使測定方法達到很高的敏感度。所生成有色產(chǎn)物的顏色深淺與欲測的抗原(抗體)含量成正比。 這種有色產(chǎn)物可用肉眼、光學(xué)顯微鏡、電子顯微鏡觀察,也可以用分光光度計(酶標儀)加以測定。其方法簡單,方便迅速,特異性強。


人脂多糖(LPS)ELISA檢測試劑盒實驗原理

用純化的抗體包被微孔板,制成固相載體,往包被抗該指標抗體的微孔中依次加入標本或標準品、生物素化的抗該指標抗體、HRP標記的親和素,經(jīng)過徹底洗滌后用底物TMB顯色。TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的該指標呈正相關(guān)。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),計算樣品濃度。


細菌脂多糖(LPS)elisa檢測試劑盒圖2

人脂多糖(LPS)ELISA檢測試劑盒標本的采集及保存

1. 血清:全血標本請于室溫放置2小時或4過了夜后于1000 x g離心20分鐘,取上清即可檢測,或?qū)吮痉庞?20或-80保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融。

2.血漿:可用EDTA或肝素作為抗凝劑,標本采集后30分鐘內(nèi)于2 - 8° C 1000 x g離心15分鐘,或?qū)吮痉庞?20或-80保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融。

3.細胞培養(yǎng)物上清或其它生物標本:1000 x g離心20分鐘,取上清即可檢測,或?qū)吮痉庞?20或-80保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融。

注:標本溶血會影響最后檢測結(jié)果,因此溶血標本不宜進行此項檢測。


細菌脂多糖(LPS)elisa檢測試劑盒圖3

人脂多糖(LPS)ELISA檢測試劑盒操作步驟

1、 取出試劑盒,于室溫(20-25)放置15-30分鐘。實驗過程應(yīng)在室溫(20-25)內(nèi)進行。

2、 取出酶標板,按照標準品的次序分別加入50μl的標準品溶液于空白微孔中。

3、空白微孔中加入50μl的樣品,空白對照加入50μl的蒸餾水;

4、 在樣品孔中加入10μl的生物素;(不含空白對照孔,切忌:生物素只加樣品孔!)

5、在各孔中加入100μl的酶標記溶液;(不含空白對照孔)

6、將酶標板用封口膠密封后,37孵育反應(yīng) 1小時;(在孵育箱中保持穩(wěn)定的溫度與濕度)

7、 充分清洗酶標板3-5次,保持各孔有充足的水壓;(濃縮洗滌液以1:100的比例與蒸餾水稀釋)

8、酶標板洗滌后用吸水紙徹底拍干;

9、各孔加入顯色劑A、B液各50μl;(不含空白對照孔)

10、各孔加入50μl終止液,終止反應(yīng);10、20-25下避光反應(yīng)15分鐘;


人脂多糖(LPS)ELISA檢測試劑盒:http://www.www.linkeyuan.cn/products-394.html

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